участков двух вирусных изолятов из Америки и одного из Западной Африки
не удалось обнаружить такие элементы. Стартовый кодон (AUG) инициации
вирусного полипротеина расположен в позиции 552 (нумерация по изоляту
PNF2161) вблизи от начала Е1 региона РНК. Установлено, что происходящие
в У — регионе вставки и выпадения нуклеиновых кислот сдвигают открытую
рамку считывания РНК ВГG, приводя к появлению дефектного "core" белка
или возможно полного его отсутствия. Эти результаты позволили высказать
предположение о использовании ВГG капсидных белков других, возможно
еще неоткрытых , вирусов или же клеточных белков, выполняющих в данном
случае роль структурных полипротеинов. После определения полной
последовательности нуклеиновых кислот РНК ВГG оказалось, что в отличие
от РНК ВГС в Е1 и Е2 регионе отсутствует гипервариабельная область. Было
высказано предположение об отсутствии главных генотипов. Существование
же генотипов возможно на уровне суптипов и изолятов. Вопрос о генотипах
GBV-
C и ВГС остается по-прежнему открытым, а опубликованные данные
по анализу различных изолятов вируса противоречивы.
Тем не менее
высказывается предположение о наличии как минимум 3-х генотипов и
нескольких субтипов вируса. По данным И. Мушавар с соавт., изоляты из
Западной Африки относят к 1 генотипу, в котором выделяются два субтипа
— 1а и 2b , в Европе и Северной Америке чаще удается выявить генотип 2а и
2b, а в Азии -3. Исследование генетической гетерогенности 354
нуклеотидного фрагмента 5'-нетранслируемого региона ВГG, в 42 изолятах
вируса из 14 стран (в том числе России), выявило два уровня геномной
вариабельности:на уровне индивидуальной инфекции и уровне изолята.
Исследование неструктурного региона РНК ВГО и экспериментальное
экспрессирование кодированных им белков определило наличие пяти белков,
информация о которых находится в зонах NS2, NS3, NS4b, NS5a и NS5b.< Их
вес находится в пределах от 20х10 3 до 70х10 3 дальтон. Эти белки
выполняют функции:
протеазы, хеликазы и РНК-зависимой РНК-
полимеразы.
Представляют интерес данные, полученные при изучении плавучей
плотности частиц ВГО в градиенте сахарозы до и после их обработки
неионном детергентом — "Твин-80", позволившие предположить наличие
липидной оболочки у вируса. Ассоциация ВГG с липидами может мешать
взаимодействию с антителами во время персистенции вируса.
Основным маркером, применяемым для выявления вируса гепатита G,
диагностики и изучения
эпидемиологии гепатита G, является PHK-OBV-
C/HOV, выявляемая методом амплификации с предварительным этапом
обратной транскрипции (RT-PCR), при которой синтезируется кДНК. Для
синтеза олигонуклеотидных праймеров использовали информацию о
последовательностях участка РНК, кодирующего хеликазу (NS3). Этот выбор
был сделан из-за высокой консервативности (83-99%) данного региона в
различных изолятах вируса. Однако дальнейшие исследования выявили, что
при тестировании некоторых образцов могут отмечаться ложнонегативные
результаты, несмотря на наличие в них возбудителя. Учитывая это, для
конструирования диагностикумов дополнительно
стали использовать
праймеры, информация о которых закодирована в 5' нетранслируемом
регионе PHK-GBV-C/HGV.
В настоящее время фирмами "Boehringer Mannheim GmbH" ("Бёрингер
Манхейм") и "Abbott" ("ЭББОТТ") выпускаются диагностикумы для
выявления РНК — методом RT-PCR. В первом из них используются
праймеры из 5'нетранслируемом и NS5a региона. Учет результатов
проводится в ИФА с помощью биотин- авидинового комплекса.
Диагностикум обладает высокой чувствительностью — 8х10 2 . В
диагностикуме фирмы "ЭББОТТ" применена лигазная технология
проведения PCR ("Abbott Lex Probe System"). Оба диагностикума пока
рекомендованы только для научных исследований. В
большинстве
лабораторий мира применяются самостоятельно изготовленные препараты,
что определяет расхождение результатов тестирования. Проведенный во
Франции внешний контроль качества исследований РНК GBV-C/HGV (21
лаборатория) выявил, что эти расхождения прежде всего определялись
различиями в чувствительности применяемых препаратов (в 7 лабораториях
чувствительность составляла 38-77%).
По аналогии с гепатитом С большие надежды связывали с выявлением
антител к GBV-C/HGV. Основой для разработки диагностических препаратов
стала информация о антигенных эпитопах, кодированных РНК GBV-C. В
качестве вирусного антигена был использован оболочечный антиген Е2,
возможно представляющий собой главную мишень для гуморального
иммунитета. Участок РНК, кодирующий Е2 антиген,
был клонирован и
введен в клетки яичника китайского хомячка (СНО), которые продуцировали
антиген. При помощи аффинной хроматографии проводили очистку Е2
антигена и использовали при конструировании ИФА-диагностикума,
предназначенного для выявления анти-Е2. Исследование сывороток крови,
полученных от больных гепатитом и здоровых лиц, выявило, что в
подавляющем большинстве случаев позитивный результат обнаружения
анти-Е2 был отмечен при отсутствии PHK-GBV-C/HGV. Эти данные
свидетельствуют, что в отличие от гепатита С, выявление антител при
гепатите G не может быть использовано для поиска вирусоносителей, а
пригодно для регистрации уже прошедшей инфекции и проведения
эпидемиологических исследований для оценки распространения инфекции в
различных группах населения.
Do'stlaringiz bilan baham: 
