И. А. Касымов,Г. Т. Мардаева,Я. К. Худайбердиев Терминология и интерпретация лабораторных данных при вирусных

 
ВИРУС ГЕПАТИТА D, BГD
(Hepatitis Delta virus) 
— возбудитель гепатита D (Дельта гепатита). BГD не принадлежит ни 
к одному из известных семейств вирусов животных. По своим свойствам 
BГD наиболее близок к вироидам и сателлитньм вирусам растений. В 1977 г. 
итальянский исследователь М. Риссетто при помощи метода 
флюоресцирующих антител обнаружил в гепатоцитах больных хроническим 
гепатитом В антиген, отличный от антигенов вируса гепатита В. Выявленный 
антиген был назван дельта-антигеном. Эксперименты по заражению 
шимпанзе материалом, содержащим дельта-антиген, продемонстрировали, 
что он является частью трансмиссивного агента (дельта-агента или BГD), 
вызывающего гепатит, отличный от других вирусных гепатитов.
BГD — сферическая частица (рис. 8) со средним диаметром 36 нм (с 
колебаниями от 28 до 39 нм), состоящая из ядра (HDAg) и внешней 
оболочки, образованной поверхностным антигеном вируса В. Плавучая 
плотность в градиенте CsCI — 1,25 /см 3. Морфологически частицы BГD, 
циркулирующие в крови больных дельта-гепатитом или носителей BГD, 
сходны с частицами Дейна, но с менее четко очерченным ядерным 
антигеном.
Геном BГD представлен однонитевой, циклической молекулой РНК, 
состоящей приблизительно из 1700 нуклеотидов. В BГD, циркулирующем в 

---

крови больных острой или хронической дельта-инфекцией, РНК BГD 
образует палочковидную неразветвленную структуру. Характер плотной 
упаковки генома определяется высокой степенью комплиментарности 
нуклеотидов, входящих в его состав. Причем, сочетание пар оснований 
гуанин-цитозин, 
составляет 
до 
60%. 
Анализ 
нуклеотидных 
последовательностей РНК BГD нескольких изолятов вируса выявил их 
частичную гетерогенность (от 72,1% до 92,0% гомологии). В геноме BГD 
имеется несколько открытых рамок считывания, как на геномных, так и на 
антигеномных нитях РНК. Причем, в отличие от вироидов и сателлитных 
вирусов растений в РНК закодирован вирусспецифический полипептид — 
HDAg (пятая открытая рамка считывания, локализованная на 
комплементарной зоне РНК BГD).
Выявлено две разновидности HDAg с молекулярными массами в 24 и 
27 кД. На их поверхности расположен общий эпитоп, определяемый при 
помощи моноклональных антител человеческого происхождения. Считается, 
что малая форма HDAg необходима для репликации BГD, а большая для 
постройки вирусной частицы. Дельта-антиген локализуется в ядрах 
инфицированных гепатоцитов, в ядрышках и/или нуклеоплазме.
HDAg имеет выраженную РНК-связывающую активность. Связывание 
происходит благодаря узнаванию антигеномной уникальной вторичной 
структуры РНК BГD, что определяет строгую специфичность связывания и 
объясняет отсутствие взаимодействия с другими вирусными и клеточными 
РНК. При нагревании BГD происходит укрепление связи HDAg с РНК, 
которая становится устойчивой к действию мочевины, гуанидина или 
меркаптоэтанола. Дельта-антиген устойчив к нагреванию, действию кислот и 
нуклеаз, но разрушается в присутствии щелочей и протеаз. Он обладает 
антигенной активностью и может быть использован для конструирования 
диагностических препаратов.
Механизм прикрепления, проникновения и раздевания BГD в клетках 
мало изучен. Вместе с тем считается, что HBsAg, покрывающий дельта-
антиген, кодированный S-геном вируса гепатита В (включая pre-SI, pre-S2 и 
S-
зону), необходим для прикрепления BГD к поверхности гепатоцита. При 
этом в отличие от частиц Дейна, в которых HBsAg представлен частицами с 
pre-Sl, pre-
S2 и S-пептидами в соотношении 1:1:4, в дельта-вирусе это 
соотношение составляет 1:5:95.
Инфицированные гепатоциты содержат как геномные (+), так и 
антигеномные (-) молекулы РНК BГD в соотношении 5-30:1. РНК BГD 
представлена линейными и циклическими формами. Общее количество 
молекул РНК BГD может достигать 100000-300000 копий в одной клетке.
Репликация РНК BГD происходит в ядре зараженного гепатоцита; по 
аналогии с вироидами она может быть описана следующим образом: на 
кольцевой молекуле геномной РНК (+) при помощи клеточного фермента 
(возможно 
ДНК-зависимой 
РНК-полимеразы 
II) 
синтезируется 
комплиментарная (-) цепь РНК. Синтез нуклеиновой кислоты 
осуществляется согласно модели раскручивающегося кольца с вытеснением 

---

5' конца РНК с последующим синтезом плюс-цепи. Возможно, антигеномные 
нити РНК сворачиваются в кольцо с последующим синтезом геномных РНК 
BГD. Расщепление линейных олигомерных структур РНК осуществляется 
при помощи клеточных ферментов. Процесс РНК РНК копирования может 
происходить по симметричному и асимметричному пути.
Вопросы, связанные с транскрипцией и трансляцией гена, 
кодирующего HDAg, до сих пор полностью не решены. Имеется скудная 
информация и о таких этапах морфогенеза, как сборка и выход вируса из 
гепатоцита.
Вирус гепатита D не может участвовать в развитии гепатитной 
инфекции без одновременной репликации вируса гепатита В. Этот факт 
определяет две возможные формы их взаимодействия:
одновременного инфицирования ВГВ и BГD — коинфекция и 
инфицирования ВГD носителя вируса гепатита В — суперинфекция. 
Характер взаимосвязи этих вирусов определяется не только использованием 
HBsAg для формирования внешней оболочки BГD, но и другими, до конца 
непонятными взаимодействиями. Так, BГD ингибирует репликацию ВГВ, 
приводя к уменьшению экспрессии HBcAg и HBsAg и угнетению активности 
ДНК-полимеразной активности в течение острой инфекции. Одним из 
возможных объяснений этого факта являются данные о стимуляции дельта-
вирусом внутриклеточного синтеза интерферона, который вызывает 
ингибицию репликации ВГВ.
Последнее время получены экспериментальные данные, что дельта-
вирус может размножаться в организме приматов и без участия вируса 
гепатита В, но при этом никаких повреждений не наблюдается. 
Предположительно наружная оболочка дельта-вируса формируется из 
клеточных белков, вследствие чего его обнаружение затруднено.
Анализ инфекционной активности дельта-вируса показал, что она 
приблизительно на пять порядков ниже по сравнению с ВГВ. 
Инфицирование дельта-вирусом может вызвать острое заболевание, 
заканчивающееся выздоровлением или формированием хронического 
носительства BГD. Экспериментальное заражение дельта-вирусом 
человекообразных обезьян-носителей HBsAg и сурков-носителей вируса 
гепатита сурков вызывает острую суперинфекцию. При этом через 2 недели 
после заражения в гепатоцитах животных удается идентифицировать дельта-
антиген, который по своим физико-химическим и иммуногенным свойствам 
идентичен дельта-антигену из гепатоцитов больного человека. Полученный 
при экспериментальной дельта-вирусной инфекции у сурков дельта-антиген 
с успехом используется для приготовления коммерческих диагностических 
препаратов, применяющихся для выявления серологических маркеров 
дельта-инфекции у людей.
Дельта-вирусную инфекцию удалось также воспроизвести и при 
заражении дельта-вирусом пекинских уток-носителей вируса гепатита 
пекинских уток.  

---

Дельта-вирус может быть обнаружен в гепатоцитах и в крови больных 
острой и хронической дельта-инфекцией. Применение иммуноэлектронной 
микроскопии, при которой используются антитела к HBsAg, позволяет 
изучать морфологию дельта-вируса. Маркерами, свидетельствующими о 
наличии дельта-вируса в исследуемом материале, служат дельта-антиген 
и/или PHK BГD.
Для обнаружения дельта-антигена в биопсийном или аутопсийном 
материале 
применяют 
метод 
флюоресцирующих 
антител 
и 
иммунопероксидазные методы, когда комплекс дельта-антигена и антител к 
нему, меченных пероксидазой хрена, визуализируют при помощи 
гистохимической реакции на пероксидазу.
В сыворотке крови дельта-антиген определяют при помощи 
иммуноферментного или радиоиммунного анализа лишь только после того, 
как исследуемый материал обрабатывается неионными детергентами (твин, 
тритон и др.), разрушающими наружную оболочку вируса, тем самым делая 
доступными антигенные детерминанты HDAg.
Детекцию РНК BГD проводят при помощи кДНК-гибридизации с 
зондами, полученными генноинженерным путем, или же методом 
амплификации кДНК ВГD, позволяющим выявлять до 10 3 молекул РНК 
BГD.
Культивирование BГD в клеточных линиях, в том числе печеночного 
происхождения с интегрированным геномом ВГВ, до сих пор были 
неудачны. Вместе с тем, описаны эксперименты по продукции BГD в линии 
клеток гепатомы человека (HUH-7) и почек мартышек (COS7) после их 
трансфекции РНК ВГD.