Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

Контингент обследованных лиц. 
Группа контроля представле-
на неродственными донорами без наследственной отягощенности и 
клинических проявлений ССЗ. Больные ИБС и ИИМ — пациенты 
отделений кардиологии и сосудистой хирургии АРКБ г. Майкопа
с инструментально подтвержденными диагнозами.
Выводы.
1. У больных ИБС и ИИМ по сравнению с донорами выявлен 
дисбаланс субпопуляций NK: достоверно (р≤0,05) повышено со-
держание субпопуляции CD56+CD16- (соответственно, 3,36±1,38%, 
t=2,95, p=0,012 при ИБС; 6,58±1,78%, t=3,93, p=0,0019 у больных
с ИИМ), продуцирующей высокие уровни медиаторов воспаления, 
но со сниженной киллерной активностью. Субпопуляции CD56-
CD16+ с высокой цитотоксической активностью у обследован-
ных больных ИБС и ИИМ снижены и составляют, соответственно, 
0,53±0,35% и 0,68±0,19%.
2 Снижение цитотоксической активности натуральных кил-
леров на фоне гиперпродукции провоспалительных медиаторов 
может способствовать накоплению пенистых клеток, кристаллов 
холестерина в интиме сосуда, провоцируя прогредиентное течение 
атеросклероза.

---

180
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
ПОЛУЧЕНИЕ ХИМЕРНОГО МОНОКЛОНАЛЬНОГО 
АНТИТЕЛА НА ОСНОВЕ ВАРИАБЕЛЬНЫХ 
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ МЫШИНОГО 
АНТИТЕЛА ПРОТИВ ЭНДОГЛИНА 
И КОНСТАНТНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ 
ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО IGG4 В КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ EXPI293
Малахов И.С., н.с.
Лаборатория гибридомной технологии ФГБУ «РНЦРХТ им. акад. 
А.М. Гранова», 
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Самойлович М.П., д.б.н., проф.
Химерные моноклональные антитела (МКАТ) представляют им-
муноглобулины (Ig), вариабельная часть которых состоит из амино-
кислотных последовательностей МКАТ мыши, константная часть 
представлена аминокислотной последовательностью Ig человека. 
Методом гибридомной технологии в лаборатории создана панель 
мышиных МКАТ против эндоглина человека [1]. Для создания хи-
мерного антитела, учитывая совокупность свойств продуцируемых 
МКАТ, отобран штамм гибридом 2С8. Из клеток штамма выделена 
мРНК, определены последовательности вариабельных частей МКАТ 
2C8. Созданы две экспрессионные плазмиды на основе вектора 
pCEP4. Одна из плазмид кодирует легкую цепь, состоящую из вари-
абельного участка легкой цепи 2С8 и константного участка каппа-
легкой цепи Ig человека. Вторая плазмида кодирует тяжелую цепь, 
состоящую из вариабельного участка тяжелой цепи 2С8 и констант-
ного участка гамма-4 тяжелой цепи Ig человека. Клетки Expi293 яв-
ляются суспензионным дериватом клеток HEK293. При культиви-
ровании в среде с сывороткой во флаконах для адгезионных культур 
Expi293 становится монослойной культурой. Проведена котранс-
фекция адгезионной культуры Expi293 плазмидами, кодирующими 
легкую и тяжелую цепи химерного МКАТ, взятых в соотношени-
ях: 5:1; 15:1; 20:1; 25:1; 30:1, двумя разными методами — кальций- 
фосфатным или с помощью Expifectamin. Наилучшие результаты 
получены для кальций-фосфатного метода и соотношения экспрес-

---

ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
181
сионных плазмид 25:1. Наименьшую эффективность получили при 
соотношении плазмид 5:1. Концентрацию химерных МКАТ в куль-
туральной жидкости определяли методом двухцентрового ИФА 
с использованием МКАТ к легким и тяжелым цепям IgG человека. 
Наивысшая концентрация химерного МКАТ составила 10 мг/л.
При трансфекции с помощью Expifectamin клеток Expi293, расту-
щих в суспензии в бессывороточной среде, выход МКАТ составил 
33 мг/л.
Таким образом, клетки Expi293 могут быть использованы для 
получения химерных МКАТ в виде монослойной культуры или в 
суспензии, однако суспензионное культивирование позволяет полу-
чить более высокий выход целевого продукта. 
Список литературы:
1. Smirnov IV, Gryazeva IV, Samoylovich MP. et al. Different pairs 
of monoclonal antibodies detect variable amounts of soluble endoglin in 
human blood plasma. Immunochem Immunopathol 2016;2(121).
Выражаю благодарность сотрудникам лаборатории 
Шашковой О.А. и Терехиной Л.А.

---

182
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ