Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИЗОЛЯЦИИ 
ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ ОСТРОВКОВ ЛАНГЕРГАНСА 
ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА 
И ЖИВОТНЫХ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОМ МЕТОДЕ 
ВЫДЕЛЕНИЯ
Бардина П.С., Кашина А.В., Корнилова И.А. 
Приволжский исследовательский медицинский университет,
Нижний Новгород, Россия
Научный руководитель: Загайнова Е.В., д.м.н., чл.-корр. РАН, доц.
Трансплантация островков Лангерганса (ОЛ) поджелудочной же-
лезы (ПЖ) является альтернативным методом лечения инсулин-де-
фицитных состояний. Эффективная изоляция большого количества 
качественных и жизнеспособных ОЛ является важной предпосыл-
кой на пути к повышению эффективности технологии трансплан-
тации.
Цель работы. 
Апробация методики выделения и очистки ОЛ 
человека и экспериментальных животных механическим путем и 
оценка жизнеспособности выделенных ОЛ.
Материалы и методы. 
Для отработки методик выделения ОЛ 
использовали ПЖ крыс, свиней и постоперационные образцы ПЖ 
человека. В ткань ПЖ интрапаренхиматозно вводили раствор кол-
лагеназы V с дальнейшей фрагментацией и ферментативным пере-
вариванием ткани ПЖ. Очистка ОЛ от экзокринной ткани прово-
дилась фильтрованием через металлическое сито с диаметром ячеек 
0,6 мм, серией центрифугировании 1200 об./2 мин. с последующим 
разделением эндокринной и экзокринной части в градиенте плотно-
сти Ficoll. Для подтверждения принадлежности выделенных клеток 
к ОЛ проводили окрашивание специфическим красителем дитизон, 
а также иммуногистохимическое окрашивание антителами к инсу-
лину и глюкагону. Жизнеспособность ОЛ анализировалась с помо-
щью окрашивания трипановым синим.
Результаты. 
Был апробирован метод изоляции ОЛ без исполь-
зования камеры Рикорди. Подобран оптимальный протокол вы-
деления ОЛ с использованием 0,1% коллагеназы V, мониторингом 

---

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
643
динамики переваривания и серией центрифугирований 5 мин,
1200 об/мин и обязательным сбором «всплывшей» фракции. Было 
выявлено, что при очистке ОЛ человека и крыс необходимо исполь-
зовать Ficoll, а при очистке ОЛ свиней использование Ficoll не требу-
ется. Была подтверждена принадлежность выделенных клеток к ОЛ 
посредством специфического окрашивания дитизоном, они соста-
вили более 90% клеток. Более 90% ОЛ оставались жизнеспособны-
ми после выделения у крыс, свиней и человека. Более 90% ОЛ крыс
и свиней проявляли жизнеспособность на протяжении 3 дней, у ОЛ 
человека этот показатель составил 76%.
Заключение:
Была апробирована методика выделения жизне-
способных ОЛ человека и экспериментальных животных механиче-
ским путем. Апробированная методика в дальнейшем может спо-
собствовать повышению эффективности выделения ОЛ человека
и экспериментальных животных.
Авторы выражают благодарность д.м.н., Загайнову В.Е.
Работа выполняется при финансировании Государственного за-
дания (2020-2022 г.) по теме «Создание технологии инкапсуляции 
островков поджелудочной железы для компенсации абсолютных ин-
сулин-дефицитных состояний».
 

---

644
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ