Дистанционные возможности и достижения

Keywords: Thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI), thrombomodulin (TM), activated 

protein  C  (APC),  human  embryonic  kidney  293  cells  (HEK  293),  Dulbecco’s  Modified  Eagles 

Medium/ Ham’s F12 (DMEM/F12), epidermal growth factor (EGF).

Thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) is a plasma zymogen that is activated to its 

active  form  activated  TAFI  (TAFIa)  by  cleavage  by  thrombin,  plasmin  or  thrombin  in  complex 

with thrombomodulin (TM). TAFI activation by the thrombin/TM complex is over 1000-fold more 

efficient then thrombin alone, and thus is thought to represent an important physiological mode of 

TAFI activation. TAFIa is a basic carboxypeptidase and a known inhibitor of plasminogen activation 

to  plasmin.  TAFIa  cleaves  carboxyl-terminal  lysine  residues  from  protein  and  peptide  substrates 

including  plasminogen  receptors  and  fibrin  degradation  products  .  Carboxyl-terminal  lysine 

residues  are  vital  in  plasminogen  activation  to  plasmin  and  cleavage  by TAFIa  of  these  residues 

on  plasminogen  receptors  reflects  a  key  role  for  TAFI  in  regulation  of  pericellular  plasminogen 

activation. 

TM is a transmembrane protein found on the surface of several cell types including endothelial 

cells.  TM  is  comprised  on  a  C-type  lectin-like  domain,  6  epidermal  growth  factor  (EGF)-like 

repeats,  a  serine/threonine-rich  domain,  a  transmembrane  domain  and  a  cytoplasmic  tail.  TM 

is  involved  in  several  physiological  processes  including  inflammation  and  coagulation.  TM  has 

also been show to be anti-metastatic factor. Expression of TM in cancer is inversely correlated to 

survival.  Several  groups  have  demonstrated  the  important  of  TM  in  mediating  cell  invasion  and 

migration of cancer cells. Horowitz and coworkers found that the anti-metastatic effects of TM are 

attributed to its thrombin binding domain. Importantly, binding of thrombin to TM is responsible for 

the activation of TAFI to TAFIa as well as the activation of protein C to activated protein C (APC). 

Horowitz and coworkers did not explicitly determine which substrate of the thrombin/TM complex is 

responsible for the anti-metastatic effects of TM. Additional studies have demonstrated that TM can 

act either as a pro- and anti-angiogenic factor. We have previously demonstrated that TAFIa inhibits 

metastatic behaviours of breast cancer cells by inhibition of plasminogen activation. Additionally, 

our unpublished data have shown that TAFIa inhibits angiogenic potential of endothelial cells in 

breast cancer through inhibition of plasminogen activation. Conversely, there are conflicting studies 

with  regard  to  the  role  of  PC  in  cancer  metastasis.  While  some  studies  have  demonstrated  that 

APC is metastatic, others have shown it can act as an anti-metastatic factor. Additionally, studies 

have shown that APC can act as a pro-angiogenic factor. We therefore sought to determine which 

substrate of the thrombin/TM complex is responsible for the anti-metastatic effects of TM and the 

role of TM in tumour angiogenesis.

Methods MDA-MB-231, human embryonic kidney 293 cells (HEK 293) and human umbilical 

vein endothelial cells (HUVECs) were purchased from ATCC. SUM149 cells were a kind gift from 

Dr. Stephen Ethier (Karmanos Cancer Institute). MDA-MB-231 cells growth in Dulbecco’s Modified 

---

27