Геном днксини ажратиш усуллари



Download 0,85 Mb.
bet3/7
Sana25.04.2022
Hajmi0,85 Mb.
#580738
1   2   3   4   5   6   7
Bog'liq
2 5204059272375179381

ДНК ни РНК дан тозалаш
Бундан кейинги жараёнда супернатант таркибидаги суюқликни центрафугалаш йўли билан олиб ташланади. Кейин пробирка тубида тоза чўкма оламиз ва уни РНКаза қўшилган юқори тузли (High Salt) буфери билан қайта ишлаймиз. Бу босқич малекуляр генетикада жуда ҳам зарур. Супернатант таркибидаги ДНК етарлича РНК лардан ҳоли бўлиши шарт. Бу жараён ДНК ни РНК дан тозалаш деб аталади.
ДНК ни ивитиш
Пробиркадаги суюқлик устига 96% этанол ёки изопропонол қўшилади ва бу ҳолда ДНК кристалл ҳолатига ўтади. Шу сабабли изопропил спирти қўшилган ДНКли суюқлик секин асталик билан -20оCли музлаткичга малум вақтга қўйилади. Бундай шароитда ДНК ни ажралиб чиқиши анча тезлашади. Музлаткичдан сўнг ДНКни центрафугада чўктириб олинади. Пробиркани юқори қисмида ҳосил бўлган суюқлик олиб ташланади ва кейинги жараёнга ўтилади.
ДНК ни тузлардан тозалаш ва эритиш
ДНК ни ҳар хил тузлардан тозалаш учун уни 70% ли спирт билан икки марта ювилади. Тузлардан тозаланган ДНК яхшилаб қуритилади. Қуритилган ДНК ҳеч қандай сувда эритилмайди чунки сув таркибида нуклеазалар бўлиши мумкин. Бу ферментлар ДНК ни жароҳатлаб парчалаб юбориши мумкин. Ажратиб олинган ДНК ТЕ буферида эритилади. Бундай РНК ва ҳар хил тузлардан тозаланган ДНК ни клонлаш, ПЗР ва бошқа мақсадларда ишлатиш мумкин.
Полимераза занжир реакцияси
Ҳар бир намунадан ажратиб олинган геном ДНКлари 0,9% ли агороза гелида электрофорез усули ёрдамида текшириб олингандан сўнг полимераза занжир реакцияси қўйилади. Генотиплаш учун микросателлит маркерлар библиотекасидан ҳамда буғдой генетик ҳариталардан фойдаланиб текширилган 100 га яқин SSR маркерлари ичидан BARC, CFD, WMC, WMS маркерлари танлаб олинди. SSR праймер жуфтлари International DNА Technologies (IDT, АҚШ) фирмасидан олинган.
ПЗР механизми

2-расм. ПЗР реакцияси цикллари (босқичлари)
ПЗР реаксиясини қўйиш жараёнларии
Тайёр бўлган ПЗР маҳсулот микросателлитлар амплификатсияси полиморфизмини текшириш юқорида келтирилган электрофорез усули ёрдамида 3.5% ли Hi-res (high resolution) агорозагелида 6 в/см электр кучланиши остида 0,5 х ТВЕ буферида амалга оширилади (3-4-расмлар).
Геллар бромли этидийда бўялиб, Аlphа Imager 3400 (Innotech Inc.,АҚШ) ускунасида суратга олинади.


Download 0,85 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   2   3   4   5   6   7




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish