Генетика, геномика ва биотехнологиянинг замонавий муаммолари

 
 
МОЛЕКУЛЯРНОЕ ТИПИРОВАНИЯ ГЕНОМА КЛУБЕНЬКОВЫХ 
БАКТЕРИЙ РОДА 
RHIZOBIUM 
 
Умаров Б.Р., Сагдиева М.Г. 
Институт микробиологии Академии наук Республики Узбекистан.
100128 г.Ташкент, ул.А.Кадыри д.7
б
[e-mail] 
Симбиоз между клубеньковыми бактериями и бобовыми растениями 
формируется на основе молекулярного сигнала обоих партнеров. Сигнальные 
молекулы клубеньковых бактерий контролируется 
hsn 
– (хозяйски 
специфичными) генами, позволяющими найти своего хозяина-партнера. 
Оценка генетического разнообразия клубеньковых бактерий имеет важное 
значение для селекции микроорганизмов в применение их для сельского 
хозяйственных культур. Данные молекулярно-генетической идентификации 
клубеньковых бактерий могут быт применены при инокуляции и 
маркировании особо вирулентных штаммов с бобовыми растениями для 
выяснения возможных источников, а также при изучении популяционной 
генетики и молекулярной филогении микроорганизмов. 
Для молекулярного типирования бактерий широкое распространения 
нашли методы, основанные на амплификации повторяющихся межгенных
палиндромных последовательностей, расположение и размер которых в 
геномах разных штаммов может существенно различаться.
Одним из широко используемых вариантов метода является 
REP PCR 
(ERIC 
и 
BOX
), которые зарекомендовали себя как нетрудоемкие и доступные 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
49 
подходы для изучения генетической гетрогенности, видовой и 
внутривидовой идентификации микроорганизмов (
1).
Цель данной работы – молекулярное типирование выделенных изолятов 
из клубеньков бобовых растений (
Rhizobium Esparseta 
и
Bradyrhizobium 
japonicum
) методами
REP PCR (ERIC 
и 
BOX
). На первом этапе исследований 
проводили таксономический анализ выделенных изолятов клубеньковых 
бактерий с помощью 
16s rDNA,
далее осуществляли отработку параметров 
PCR
для молекулярного типирования отобранных штаммов 
Rhizobium 
(Sinorhizobium
и 
Bradyrhizobium
). 
PCR 
проводили, применяя праймеры 
BOX 
A1R, ERIC 1R, ERIC 2, REP 1R, REP 2I 
при температуре отжига 50 – 52 - 55
0
С. 
Результаты электрофоретического анализа продуктов 
PCR
показали, что 
наиболее воспроизводимые и легко идентифицируемые 
ERIC
фингерпринты 
получены при 50
0
С. Оптимизированные параметры 
ERIC
-
PCR
и 
BOX
-
PCR
использовали в дальнейшей работе для молекулярного типирования 
изучаемых штаммов клубеньковых бактерий. При проведении 
ERIC
-
PCR
для 
анализируемых отобранных культур клубеньковых бактерий рода 
Rhizobium
получены штаммоспецифичные фингерпринты, содержащие от 1-3 
фрагментов размером 100-900 п.н. В 
BOX
-
PCR
фингерпринтах 
анализируемых штаммов присутствовали 2-15 фрагментов размером 100-
1000 п.н. Для других анализируемых штаммов получены уникальные 
фингерпринты, содержащие набор отличающих продуктов 
PCR
и 
отражающие генетическую гетрогенность культур. Полученные результаты 
согласуются с литературными данными о высокой степени сходства 
геномных фингерпринтов разных штаммов клубеньковых бактерий 
Rhizobium
, что свидетельствует об их тесном филогенетическом родстве (
1). 
Наблюдаемый феномен открывает возможности применения данного 
подхода для видовой идентификации этих микроорганизмов. 
Полученные результаты подтверждают перспективность использования 
методов 
REP PCR (ERIC
и 
BOX) 
– для видовой идентификации и выявления 
внутривидовой идентификации и выявления внутривидового генетического 

---

Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г. 
50 
полиморфизма клубеньковых бактерий с целью мониторинга и контроля 
бактериальной инокуляции сельскохозяйственных культур. 
Список использованной литературы 
1.
Versalovic J et al.,. Nucleic Acids Res. 1991 Dec 25; 19(24): 6823–6831.