Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г.
62
желудка (9073,55±3702.32). Экспрессия гена NUCB2 была незначительной в
париетальных клетках желудка (1825,33±614,56).
Количественный ПЦР анализ показал высокую экпрессию мРНК NUCB2
в слизистой оболочке желудка. Содержание мРНК в клетках желудка в 16 раз
выше по сравнению с мРНК из головного мозга крыс (относительные
соотношения по сравнению с клетками мозга, для слизистой оболочки
желудка равна 16,38 ± 0,85; для клеток сердца равна 1,40 ± 0,84).
Анализ Вестерн-блоттинга растворимых и мембранных белков
слизистой оболочки желудка, поджелудочной железы и гипофиза с
использованием антител против несфатин-1, показал наличие нуклеобиндин
2 белка (50 кДа) во всех белковых фракциях мембран. В растворимых
фракциях эндокринных клеток слизистой
оболочки желудка и тканях
поджелудочной железы было обнаружено снижение молекулярной массы,
приблизительно на 3 кДа. В то же время, в растворимой фракции гипофиза
были обнаружены пептиды такого же размера, что и в мембранной фракции.
Иммуногистохимическое окрашивание клеток желудка крысы совместно с
несфатином-1, грелином, гистидиндекарбоксилазой или антителами к
соматостатину показало наличие двух подтипов несфатин-1-позитивных
эндокринных клеток. Было обнаружено, что несфатин-1 и грелин совместно
экспрессируются в клетках средней части желез желудка, в то
время как в
нижней
части
желез
желудка
несфатин-1
коэкспрессируется
с
соматостатином
или
гистидиндекарбоксилазой.
С
помощью
высокоразрешающей конфокальной микроскопии были обнаружены две
отдельные популяции внутрицитоплазматических везикул этих клеток. Часть
везикул содержали несфатин-1, а другая - грелин иммунореактивности. Нами
также было показано, что грелин и несфатин-1 иммунореактивности
находятся в различных везикулах Х/А-типа эндокринных клеток слизистой
оболочки желудка. Эти результаты указывают на то,
что грелин и
NUCB2/несфатин-1 могут синтезироваться самостоятельно в зависимости от
Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г.
63
метаболических условий, и задействовании соответствующих систем
передачи внутриклеточных сигналов.
Нами было показано, что голодание увеличивает экспрессию мРНК
грелина в желудке. Снижение содержания этого пептида в клетках типа X/А
и увеличение уровня грелина в плазме после голодания, также указывает на
увеличение синтеза и секреции грелина.
Таким
образом,
нами
обнаружена
селективная
несфатин-1
иммунореактивность в желудке, поджелудочной железе, гипофизе и
семенниках. Во всех других тканях отсутствовали несфатин-1 иммунное
окрашивание. Слизистая желудка экспрессирует
наибольше количество
NUCB2 по сравнению с другими органами. Большинство грелин-
продуцирующих
Х/А
клеток
желудка,
также
экспрессируют
NUCB2/несфатин-1.
При 24-часовом голодании у крыс экспрессия мРНК нуклеобиндина 2 в
эндокринных клетках желудка значительно снижается, что указывает на
регуляторную роль периферического несфатин-1 в энергетическом
гомеостазе.
Do'stlaringiz bilan baham: