Copper metallurgical slags: mineralogy, bio/weathering processes and metal bioleaching

6.2.4  Sampling protocol 
The  pH  of  the  weathering  solution  was  measured  during  sampling  immediately  after  slag 
removal;  the  solutions  were  then  divided  onto  three  aliquots.  The  first  aliquot  was  filtered 
through 0.22 µm  cellulose acetate  filters  (Minisart) and  acidified  with  65% HNO
3 
(2% v/v., 
Suprapur, Merck) in case of abiotic experiments, while filtered biotic aliquots were subjected 
to  70%  perchloric  acid  (HClO
4
)  digestion  at  80°C  for  the  determination  of  the  dissolved 
fraction.  One  biotic  aliquot  was  not  filtered  but  submitted  to  perchloric  acid  (HClO
4
) 
digestion at 80°C for the determination of total elements released from slag upon incubation 
experiments.  It  was  assumed  that  the  difference  between  the  total  and  dissolved  fraction 
represents microbial uptake of elements and/or mineral precipitate formation. The last aliquot 
was  filtered  through  0.22  µm  acetate  cellulose  filers  (Spartan  13/0.2  RC  Whatman)  for 
metabolites determination. In order to confirm sterile conditions were maintained, weathering 
solutions were plated onto agar plates every sampling and observed with respect to bacterial 
growth.