Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах


Восстанавливающий раствор



Download 209,86 Kb.
Pdf ko'rish
bet5/13
Sana23.02.2022
Hajmi209,86 Kb.
#161799
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13
Bog'liq
2.2.56 Аминокислотный анализ

Восстанавливающий раствор. 83,3 мкл пиридина, 16,7 мкл 4-
винилпиридина, 16,7 мкл трибутилфосфина и 83,3 мкл воды помещают в 
подходящий контейнер и перемешивают. 
Методика. Ампулу для гидролиза с образцом белка/пептида (от 1 мкг до 
100 мкг) помещают в большую ампулу. Переносят восстанавливающий раствор в 
большую ампулу, герметично запаивают в вакууме (около 50 мкм ртутного столба, 
или 6,7 Па) и нагревают при температуре около 100 °С в течение 5 мин. Затем 
внутреннюю ампулу для гидролиза помещают в вакуумный эксикатор и сушат в 
течение 15 мин для удаления остатков реактивов. Пиридилэтилированный 
образец затем гидролизуют согласно описанной ранее методике. Для оценки 
открываемости 
пиридилэтилцистеина 
параллельно 
проводят 
реакцию 
пиридилэтилирования стандартного образца белка, содержащего 1—8 остатков 
цистеина. Длительное время инкубации при реакции пиридилэтилирования может 
быть причиной модификации концевых α-аминогрупп и ε-аминогрупп лизина в 
белке. 
МЕТОД 8 
Восстановление и алкилирование цистеина/цистина происходит при 
пиридилэтилировании в жидкой фазе. 
Исходные растворы. Готовят и фильтруют 3 раствора: 1 М раствор трис-
гидрохлорида с рН 8,5, содержащий 0,004 М динатрия эдетата (исходный раствор 


А); 8 М раствор гуанидина гидрохлорида (исходный раствор В); 10 % раствор 2-
меркаптоэтанола (исходный раствор С). 
Восстанавливающий раствор. Для получения буферного раствора 6 М 
раствора гуанидина гидрохлорида в 0,25 М растворе трис-гидрохлорида 
смешивают 1 объем исходного раствора А и 3 объема исходного раствора В.
Методика. Около 10 мкг испытуемого образца растворяют в 50 мкл 
восстанавливающего раствора и прибавляют около 2,5 мкл исходного раствора С. 
Выдерживают при комнатной температуре в защищенном от света месте в 
атмосфере азота или аргона в течение 2 ч. Для проведения реакции 
пиридинэтилирования к раствору белка прибавляют около 2 мкл 4-винилпиридина 
и выдерживают дополнительно 2 ч при комнатной температуре в защищенном от 
света месте. Обессоливают белок/пептид методом обращенно-фазовой ВЭЖХ, 
собирая белковую/пептидную фракцию. Перед кислотным гидролизом собранный 
образец может быть высушен при помощи вакуумного центрифугирования. 
МЕТОД 9 
Восстановление и алкилирование цистеина/цистина происходит при 
карбоксиметилировании в жидкой фазе. 

Download 209,86 Kb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish