Адсорбцион хроматография усули асослари

8. ЮССХ усулида ишлатиладиган детекторлар ва уларнинг турлари HPLC detektorlari 1. UV 2. diodlar qatori 3. Lyuminestsent 4. Elektrokimyoviy 5. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida turli xil aniqlash usullari qo'llaniladi. Umumiy holda, xromatografik ustundan so'ng, unda erigan komponentlar bilan harakatlanuvchi faza detektor hujayraga kiradi, bu erda uning u yoki bu xususiyatlari doimiy ravishda o'lchanadi (spektrning ultrabinafsha yoki ko'rinadigan hududida yutilish, floresans, sinishi. indeks, elektr o'tkazuvchanligi va boshqalar). Olingan xromatogramma mobil fazaning ba'zi fizik yoki fizik-kimyoviy parametrlarining vaqtga bog'liqligi grafigi hisoblanadi.
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida eng keng tarqalgan detektorlar spektrofotometrikdir. Maxsus mo'ljallangan mikroelementdagi moddalarni elyusiya qilish jarayonida elyuatning optik zichligi oldindan tanlangan to'lqin uzunligida o'lchanadi. Detektorning chiziqliligining keng diapazoni ham aralashmalarni, ham aralashmaning asosiy tarkibiy qismlarini bitta xromatogrammada tahlil qilish imkonini beradi. Spektrofotometrik detektor o'zining ish diapazonidagi (odatda 190-600 nm) har qanday to'lqin uzunligida aniqlash imkonini beradi. Bir vaqtning o'zida bir nechta to'lqin uzunliklarida aniqlash imkonini beruvchi ko'p to'lqinli detektorlar va butun ish to'lqin uzunligi diapazonida (odatda 190-950 nm) bir vaqtning o'zida optik zichlikni qayd etish imkonini beruvchi diodli massiv detektorlari ham qo'llaniladi. Bu detektor hujayradan o'tuvchi komponentlarning yutilish spektrlarini qayd etish imkonini beradi.
Flüorimetrik detektor floresan birikmalar yoki floresan hosil bo'lmagan birikmalarni ularning floresan hosilalari shaklida aniqlash uchun ishlatiladi. Ftorimetrik detektorning ishlash printsipi so'rilgan yorug'likning lyuminestsent emissiyasini o'lchashga asoslangan. Absorbsiya odatda spektrning ultrabinafsha mintaqasida amalga oshiriladi, floresan nurlanishning to'lqin uzunliklari so'rilgan nurning to'lqin uzunliklaridan oshadi. Fluorometrik detektorlar juda yuqori sezuvchanlik va selektivlikka ega. Floresan detektorlarining sezgirligi spektrofotometriklarga qaraganda taxminan 1000 baravar yuqori. Zamonaviy lyuminestsent detektorlar nafaqat xromatogrammalarni olish, balki tahlil qilinadigan birikmalarning qo'zg'alish va floresans spektrlarini qayd etish imkonini beradi.
Spektrning ultrabinafsha va ko'rinadigan hududlarida (masalan, uglevodlar) zaif so'rilgan birikmalarni aniqlash uchun foydalaning. refraktometrik detektorlar (refraktometrlar). Ushbu detektorlarning kamchiliklari past (spektrofotometrik detektorlarga nisbatan) sezgirligi va signal intensivligining sezilarli haroratga bog'liqligi (detektor termostatlangan bo'lishi kerak), shuningdek, ularni gradient elutsiya rejimida ishlatishning mumkin emasligi.
Ish printsipi evaporativ lazer nurlarining tarqalish detektorlari harakatlanuvchi fazani tashkil etuvchi xromatografik erituvchilar va tahlil qilinadigan moddalarning bug‘ bosimidagi farqga asoslanadi. Ustun chiqishidagi mobil faza nebulizerga kiritiladi, azot yoki CO 2 bilan aralashtiriladi va nozik dispersli aerozol shaklida 30-160 ° S haroratli isitiladigan evaporatator trubasiga kiradi, unda mobil faza bug'lanadi. Tahlil qilinadigan moddalarning uchuvchan bo'lmagan zarralari aerozollari dispersiya kamerasida yorug'lik oqimini tarqatadi. Yorug'lik oqimining tarqalish darajasiga qarab, aniqlangan birikma miqdorini aniqlash mumkin. Detektor refraktometrikga qaraganda sezgirroq, uning signali namunaning optik xususiyatlariga, tahlil qiluvchi moddalardagi funktsional guruhlarning turiga, mobil faza tarkibiga bog'liq emas va gradient elyusiya rejimida ishlatilishi mumkin. .
Elektrokimyoviy detektorlar (konduktometrik, amperometrik, kulometrik va boshqalar). Amperometrik detektor qattiq elektrod yuzasida oksidlanishi yoki kamayishi mumkin bo'lgan elektroaktiv birikmalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Analitik signal - oksidlanish yoki qaytarilish oqimining kattaligi. Detektor xujayrasi kamida ikkita elektrodga ega - ishchi elektrod va mos yozuvlar elektrod (kumush xlorid yoki po'lat). Elektrodlarga ish potentsiali qo'llaniladi, uning qiymati aniqlanayotgan birikmalarning tabiatiga bog'liq. O'lchovlar doimiy potentsialda ham, impulsli rejimda ham, bitta signalni yozish davri davomida ishchi elektrod potentsialining o'zgarishi profili o'rnatilganda amalga oshirilishi mumkin. Amperometrik detektor uglerod materiallaridan (ko'pincha shishasimon uglerod yoki grafit) va metalldan: platina, oltin, mis, nikeldan tayyorlangan ishchi elektrodlardan foydalanadi.
Ion xromatografiyasida anion va kationlarni aniqlash uchun konduktometrik detektor ishlatiladi. Uning ishlash printsipi moddaning elutsiyasi paytida mobil fazaning elektr o'tkazuvchanligini o'lchashga asoslangan.
Mass-spektrometrik detektor juda informatsion bo'lib, u yuqori sezuvchanlik va selektivlikka ega. Suyuq xromatografiya uchun massa spektrometrlarining so'nggi modellari 20 dan 4000 amu gacha bo'lgan m / z massa oralig'ida ishlaydi.
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi Furye-IR detektorlari, radioaktivlik va boshqalardan ham foydalanadi.Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (yuqori bosimli suyuqlik xromatografiyasi) kolonnali xromatografiya usuli bo'lib, unda harakatlanuvchi faza statsionar faza (sorbent) bilan to'ldirilgan xromatografik ustun orqali harakatlanadigan suyuqlikdir. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi uchun ustunlar kirish joyida yuqori gidravlik qarshilik bilan tavsiflanadi.Moddalarning ajralish mexanizmiga ko'ra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasining quyidagi variantlari farqlanadi: asosiy namoyon bo'ladigan molekulalararo o'zaro ta'sirlarning tabiatiga muvofiq adsorbsion, bo'linish, ion almashinish, chiqarib tashlash, xiral va boshqalar. Adsorbsion xromatografiyada moddalarning ajralishi ularning sirti rivojlangan sorbent yuzasidan, masalan, silikageldan adsorbsiyalanish va desorbsiyalanish qobiliyatining har xilligi tufayli yuzaga keladi. Bo'linishning yuqori samarali suyuq xromatografiyasida ajralish statsionar (qoida tariqasida, statsionar tashuvchining yuzasiga kimyoviy payvandlangan) va ko'chma fazalar o'rtasida ajratiladigan moddalarning tarqalish koeffitsientlaridagi farq tufayli sodir bo'ladi. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi “Identifikatsiya”, “Chet el aralashmalari”, “Eritish”, “Dozalashning bir xilligi”, “Miqdoriy aniqlash” sinovlarida dori vositalarining ham sifat, ham miqdoriy tahlili uchun muvaffaqiyatli qo‘llaniladi. Shuni ta'kidlash kerakki, xromatografiya bir namunada bir nechta testlarni, jumladan "Identifikatsiya" va "Miqdoriy aniqlash" ni birlashtirish imkonini beradi. Ko'p ishlatiladigan sorbentlar:silikagel, alumina oddiy fazali xromatografiyada ishlatiladi. Bu holatda ushlab turish mexanizmi odatda adsorbsiya hisoblanadi;silika jeli, qatronlar yoki payvandlangan kislotali yoki asosiy guruhlarga ega polimerlar. Qo'llash sohasi - ion almashinuvi va ion xromatografiyasi;

• 
  silika jeli yoki ma'lum bir gözenek hajmi taqsimotiga ega polimerlar (o'lchamni istisno qilish xromatografiyasi);
  
• 
  kimyoviy modifikatsiyalangan sorbentlar (bog'langan fazali sorbentlar), ko'pincha silikagel asosida tayyorlanadi. Saqlash mexanizmi mobil va statsionar fazalar o'rtasida adsorbsiya yoki tarqatishdir. Ko'lami payvand qilingan funktsional guruhlarning turiga bog'liq. Ayrim turdagi sorbentlardan ham teskari, ham normal fazali xromatografiyada foydalanish mumkin;
  
• 
  kimyoviy modifikatsiyalangan chiral sorbentlar, masalan, tsellyuloza va amiloza hosilalari, oqsillar va peptidlar, siklodekstrinlar, enantiomerlarni ajratish uchun ishlatiladigan xitozanlar (xiral xromatografiya).